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    上海研域生物常見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)需要哪些環(huán)境因素?

    發(fā)布時(shí)間: 2024-03-29  點(diǎn)擊次數(shù): 514次

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    1.無(wú)菌環(huán)境

    無(wú)毒和無(wú)菌是體外培養(yǎng)細(xì)胞的首要條件。細(xì)胞在活體內(nèi),解毒系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)可抵抗微生物或其他有害物質(zhì)的入侵,但細(xì)胞在體外培養(yǎng)的過(guò)程中,缺乏機(jī)體免疫系統(tǒng)的保護(hù)而喪失對(duì)微生物的防御能力和對(duì)有害物質(zhì)的解毒能力。為保證細(xì)胞能在體外環(huán)境中生長(zhǎng)繁殖,必須要確保無(wú)菌工作區(qū)域、良好的個(gè)人衛(wèi)生、無(wú)菌試劑和培養(yǎng)基以及無(wú)菌操作。

    常見(jiàn)的微生物污染有支原體、細(xì)菌、真菌。支原體無(wú)致死毒性,可與細(xì)胞長(zhǎng)期共存,對(duì)細(xì)胞有潛在影響,但體積小,不易鑒別,可借助于地衣紅或Hoechst33342染色來(lái)進(jìn)行檢測(cè)。細(xì)菌增殖快,在短時(shí)間內(nèi)即可大量擴(kuò)增,并產(chǎn)生毒素殺死細(xì)胞。真菌的種類(lèi)繁多,肉眼可見(jiàn),漂浮于培養(yǎng)液面上,可呈絲狀、管狀或樹(shù)枝狀等。


    2.合適的溫度

    一般哺乳類(lèi)與禽類(lèi)細(xì)胞在體外培養(yǎng)的適宜溫度是37~38℃,不適宜的環(huán)境溫度會(huì)影響細(xì)胞的生長(zhǎng)。細(xì)胞對(duì)低溫的耐受能力要強(qiáng)于對(duì)高溫的耐受能力,在低溫下,細(xì)胞的代謝活力及核分裂能力降低。若溫度不低于0℃,雖然細(xì)胞代謝受到影響,但無(wú)損傷作用;25~35℃時(shí),細(xì)胞以緩慢的速度生長(zhǎng);但若被置于40℃數(shù)小時(shí),則不僅不利于細(xì)胞生存、生長(zhǎng),甚至可導(dǎo)致其死亡。


    3.氣體環(huán)境與pH

    細(xì)胞的體外培養(yǎng)需要理想的氣體環(huán)境,氧氣、二氧化碳是細(xì)胞生存的必要條件。氧氣參與細(xì)胞的三羧酸循環(huán),為細(xì)胞生存、代謝與合成提供能量;二氧化碳既是細(xì)胞的代謝產(chǎn)物,是細(xì)胞生長(zhǎng)的必需成分,又與維持培養(yǎng)液的pH有關(guān)。大多數(shù)細(xì)胞適宜的pH范圍往往是7.2~7.4。在開(kāi)放式培養(yǎng)中,以5%的二氧化碳?xì)怏w比例為宜。


    4.適宜的滲透壓

    高滲溶液或低滲溶液會(huì)引起細(xì)胞發(fā)生褶皺、腫脹、破裂。因此,滲透壓是體外培養(yǎng)細(xì)胞的重要條件之一。多數(shù)體外培養(yǎng)的細(xì)胞對(duì)滲透壓都有一定的耐受能力,實(shí)際應(yīng)用中,260~320mmol/L的滲透壓可適用于大多數(shù)細(xì)胞。


    每種待測(cè)物都有一個(gè)可測(cè)定的濃度或活性范圍,常見(jiàn)細(xì)胞樣品結(jié)果若超過(guò)此范圍,分析儀將顯示結(jié)果超過(guò)范圍的提示,表示試劑已經(jīng)變質(zhì),應(yīng)更換合格的試劑,若使用連續(xù)監(jiān)測(cè)法,兩點(diǎn)法測(cè)定酶活性時(shí),若酶活性非常高,底物接近被耗盡,吸光度上升或下降會(huì)超過(guò)某一吸光度,變化范圍,監(jiān)測(cè)期的吸光度將偏離線(xiàn)性,使測(cè)定結(jié)果不可靠。

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